獲得性免疫缺陷綜合征的神經系統表現檢查

一、檢查

　　[艾滋病的自助檢測方法]

　　艾滋病病毒HIV是一種能攻擊人體內臟系統的病毒。它把人體免疫系統中最重要的T4淋巴組織作為攻擊目標，大量破壞T4淋巴組織，產生高致命性的內衰竭。這種病毒在地域內終生傳染，破壞人的免疫平衡，使人體成為各種疾病的載體。

　　HIV本身并不會引發任何疾病，而是當免疫系統被HIV破壞后，人體由于抵抗能力過低，喪失復制免疫細胞的機會，從而感染其他的疾病導致各種復合感染而死亡。

　　艾滋病病毒在人體內的潛伏期平均為12年至13年，在發展成艾滋病病人以前，病人外表看上去正常，他們可以沒有任何癥狀地生活和工作很多年。

　　艾滋病自助檢測是指個人使用HIV專業檢測試劑自行操作檢測艾滋病毒抗體。此種檢測試劑屬于快速診斷試劑，應用了國際先進的免疫層析法快速檢測技術，免疫層析法 (Immunochromatography) 是九十年代興起的一種基于免疫膠體金技術的快速診斷技術，有著優異的靈敏度和特異性，快速準確可靠，操作簡單，個人也可以操作，由于自測更有利于保護個人隱私，所以提高了個人檢測艾滋病的積極性，促進了艾滋病預防工作的開展。

　　艾滋病的個人自測在部分國家發達國家地區，包括中國香港特別行政區已經推廣應用 ，這些地區只需憑醫生處方即可自行購買檢測試劑進行自我檢測HIV 。在我國，自測屬于艾滋病家庭檢測范疇，在國家艾滋病檢測技術規范中有相關的論述。只要獲得專業人士的指導，操作正確，檢測結果是可靠的，建議多次檢測復查以便讓結果更可靠。

　　如果自測呈現檢測陽性者，由于任何醫學檢測均可能存在假陽性的可能，所以請先別緊張，還需要做艾滋病確診試驗復查，復查結果才是最終確診結果。我們有完善的醫療配套服務，可以指導你到專業的醫院進行進一步的治療。

　　[酶聯免疫法的應用]

　　酶聯免疫法的應用：艾滋病病毒抗體檢測是診斷HIV感染的常規方法。隨著HIV抗體檢測工作需求的擴大，除了經典的雙抗原夾心酶聯免疫法(ELISA)以外，快速檢測試劑以其操作方便快捷也得到了日益廣泛的使用。

　　酶聯免疫法，簡稱ELISA。

　　它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。

　　步驟：ELISA用血清來檢測，首先血液要經過至少半個小時的凝集，然后取血清(這是有些網友不理解為什么醫院抽完了血對血置之不理的原因，其實是誤會)。將酶復合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性、陽性對照，還有就是質控品(這是嚴格的要求，它的范圍必須在質控范圍內)。經過一個小時的孵育，然后洗板，加底物，半個小時避光反應后加終止液即完成反應部分，然后就是讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。

　　基本原理是：

①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

　　酶聯免疫法的應用：ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：

①固相的抗原或抗體，

②酶標記的抗原或抗體，

③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。

　　具體方法有：

　　1、雙抗體夾心法

　　雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。

　　(2)加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。

　　(3)加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

　　(4)加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

　　根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

　　2、雙位點一步法

　　在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法測定中，酶聯免疫法的應用應注意鉤狀效應(hookeffect)，類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

　　3、間接法測抗體

　　間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。

　　(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

　　(3)加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

　　(4)加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

　　本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

　　4、競爭法

　　競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

　　(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

　　(2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。 (3)加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。

　　5、捕獲法測IgM抗體

　　血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下：

　　(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

　　(2)加入稀釋的血清標本：保溫反應后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。

　　(3)加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。

　　(4)加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。

　　(5)加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。

　　6、應用親和素和生物素的ELISA

　　親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。現在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素(strepavidin)。生物素(biotin)又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素-羥基琥珀亞胺酯(biotin-hydroxysuccinimide，BNHS)可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。

　　親和素-生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用于間接包被，亦可用于終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素-生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然后連接親和素-酶結合物，以放大反應信號。