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免疫印跡技術-檢查項目-大眾養生網

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免疫印跡技術

基本信息

  • 專科分類： 生長發育檢查
  • 檢查分類： 生化檢查
  • 適用性別： 男女均適用
  • 是否空腹： 　非空腹
  • 手術參考價： 120元
  • 科　室： 生長發育檢查

免疫印跡技術檢查簡介

免疫印跡法是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測,具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優點，是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法，如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。

免疫印跡技術檢查過程

(一)蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。

(二)電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。

(三)轉移：(半干式轉移)

1、電泳結束后將膠條割至合適大小，用轉膜緩沖液平衡，5min×3次。

2、膜處理：預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉膜緩沖液中10min。

3、轉膜：轉膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2，轉移1.5hr。轉移結束后，斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然后用雙蒸水洗，風干夾于兩層濾紙中保存，留與顯色結果作對比。

(四)免疫反應：

1、用0.01MPBS洗膜，5min×3次。

2、加入包被液，平穩搖動，室溫2hr。

3、棄包被液，用0.01MPBS洗膜，5min×3次。

4、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部)，4℃放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實驗組相同。

5、棄一抗和1%BSA，用0.01MPBS分別洗膜，5min×4次。

6、加入辣根過氧化物酶偶聯的二抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋)，平穩搖動，室溫2hr。

7、棄二抗，用0.01MPBS洗膜，5min×4次。

8、加入顯色液，避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。

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