三級甲等綜合醫(yī)院國營
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明膠凝集試驗(gelatinagglutinationtest,GAT)
【準(zhǔn)備】
(1)配制Baker液(Bakersolution)
葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g
NaCl0.20gKH2PO40.01g
加雙蒸水至100mL。
(2)用Baker液配制10%白明膠溶液,并置37℃水浴中備用。
(3)精子懸浮液:取正常新鮮精液(精子密度為80×106/mL左右,活動率>60%,a、b兩級活動精子>70%),室溫液化,用Baker液稀釋至40×106/mL,置37℃水浴中保存?zhèn)溆谩?/p>
(4)待檢血清及對照血清處理,均經(jīng)56℃水浴加熱30min,以滅活補體。隨后用Baker液,將兩種血清均作1∶4~1∶32倍數(shù)稀釋,存放于37℃水浴中備用。
【方法】
(1)取一定量的精子懸浮液,加入等量的10%明膠溶液,充分混合后,取0.3mL分別加入裝有0.3mL對倍稀釋血清的各支小試管內(nèi),并使其充分混合。
(2)將混合液分別用毛細吸管移置另一小試管(3mm×30mm)內(nèi),37℃孵育2h,移置4℃放置5min,待明膠凝固后,觀察明膠內(nèi)精子凝集情況,并判斷結(jié)果。
【判斷】
(1)陰性:精子在明膠內(nèi)均勻分散,若以黑紙作背面對光觀察,呈均勻乳白色,不見凝集塊。
(2)陽性:精子成小凝集塊,對光觀察可見小凝集塊有如雪花紛飛狀,不難鑒別。
(3)抗體效價:以陽性反應(yīng)的最高血清稀釋倍數(shù)為血清凝集抗體效價。
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