旅行者腹瀉檢查
1.糞便白細(xì)胞分類
玻片下滴亞甲藍(lán)2滴，將糞便標(biāo)本在其中涂勻，加蓋玻片2～3min后鏡檢，滲出性病變主要為多核白細(xì)胞，傷寒、過敏性反應(yīng)多為單核細(xì)胞。
2.糞便培養(yǎng)病原菌
連續(xù)3次的常規(guī)糞便培養(yǎng)，必要時(shí)還可重復(fù)。過去常規(guī)進(jìn)行志賀菌和沙門菌的檢出，已大大不夠，除采用雙硫與血液瓊脂培養(yǎng)基外，應(yīng)根據(jù)可疑致病菌選用相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件，厭氧培養(yǎng)(如彎曲菌、難辨梭桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌等)、含有抗生素的選擇性培養(yǎng)基(如彎曲菌)、堿性或含鹽培養(yǎng)基(如霍亂弧菌及其他弧菌)，以及國內(nèi)提出的冷增菌及堿化處理后雙硫平板檢測耶爾森菌等。選擇糞便中的膿液及黏液部分，及時(shí)接種;最好是病人服用抗菌藥物前采樣。采用多種特殊培養(yǎng)基，在不同含氧情況下培養(yǎng);挑取多個(gè)菌落作各種鑒定，是提高陽性培養(yǎng)結(jié)果的關(guān)鍵。輪狀病毒雖已能成功分離，但手續(xù)繁瑣，要求條件高，檢出時(shí)間長，非一般實(shí)驗(yàn)室所能完成。
3.循環(huán)抗體的測定
大多數(shù)抗體檢測系統(tǒng)(包括血凝抑制法、ELISA法等)，對(duì)病毒和細(xì)菌均具有特異性。已用血清抗體滴度的變化來測定諾瓦克類病毒的流行、輪狀病毒和ETEC的鑒定。但免疫熒光對(duì)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲抗體則易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
4.腸毒素的檢測
(1)生物學(xué)鑒定：
用乳鼠灌胃法鑒定ST毒素(因其分子量過小，其他免疫診斷有困難)、親水氣單胞菌腸毒素等。也可用家兔腸襻分泌試驗(yàn)(secretion in rabbit intestinal loops test)檢測ST和LT腸毒素。
(2)組織培養(yǎng)法：
已能用Y1腎上腺細(xì)胞、中國田鼠卵細(xì)胞(CHO)等組織培養(yǎng)細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞毒素和LT腸毒素的分類。
(3)Biken試驗(yàn)：
由Elek和Ouchtertory試驗(yàn)的原理組成。在瓊脂板上產(chǎn)LT克隆，能與抗霍亂抗血清形成沉淀線來區(qū)別腸毒素。
5.病毒RNA凝膠電泳
可直接從糞便標(biāo)本中提取病毒RNA，用聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染色法，按特征性RNA電泳圖譜，進(jìn)行輪狀病毒的分類與快速診斷。
6.DNA分子雜交試驗(yàn)
以放射自顯影放射性核素標(biāo)記法，試用于輪狀病毒的檢測、EIEC腸毒素的同源DNA編碼基因的檢測等。
7.DNA同源學(xué)檢查
用遺傳工程技術(shù)鑒定致病弧菌、大腸埃希桿菌的產(chǎn)腸毒素質(zhì)粒。
8.電鏡與免疫電鏡檢查
可直接觀察病毒形態(tài)及特異性抗原顆粒的檢出，用ELISA法檢測輪狀病毒雖已大大超過電鏡檢查，但電鏡對(duì)其他致腹瀉性病毒如腺病毒、冠狀病毒等，仍屬需要。對(duì)隱孢子蟲的結(jié)構(gòu)和生活循環(huán)可進(jìn)行觀察，電鏡掃描對(duì)腸道微生物，能獲得特殊形象，但手續(xù)過繁。
9.免疫學(xué)檢查
包括ELISA、固相放射免疫法及反向被動(dòng)血凝法。用于檢測糞便中細(xì)菌、病毒抗原、血清中特異性抗體，特別以單克隆抗體為診斷試劑應(yīng)用以來，大大提高了靈敏性與準(zhǔn)確性，已用于大腸埃希桿菌LT腸毒素、輪狀病毒、嬰幼兒腹瀉病毒的鑒定和阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲抗原、抗體等的檢測。
10.氣相色譜儀
已較普及地用于對(duì)厭氧菌的鑒定，如用于難辨梭狀芽孢桿菌的快速診斷等。
11.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)
特異擴(kuò)增病原體目的基因，簡便、快速、敏感，不需培養(yǎng)可直接用于糞便檢測，是目前感染性腹瀉，尤其是病毒性腹瀉病原診斷的一種理想技術(shù)。
12.芯片技術(shù)
DNA芯片技術(shù)或基因芯片是指同時(shí)將極其大量的探針分子固定到固相(玻璃片或硅片)支持物上，借助核酸分子雜交配對(duì)的特性將DNA樣品的序列信息作高通量、高效率的解讀和分析的技術(shù)。
(1)DNA芯片技術(shù)的特點(diǎn)有：
?、傥⒘炕?上樣量最小達(dá)0.25～1nl)。
②規(guī)模大、信息儲(chǔ)量大(已有短陣排列高于100萬種的寡核苷酸探針)。
?、鄄⑿谢?如30萬種微矩陣排列的探針同時(shí)與1萬種待測DNA雜交，完成雜交)。
④高效率和高度自動(dòng)化(由于信息容量大、矩陣排列、同時(shí)檢測)，操作、運(yùn)行完全自動(dòng)化，故效率極高。
(2)DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛，前景廣闊、進(jìn)展迅速。主要應(yīng)用于：
①DNA序列分析。
?、诨蛲蛔儭⒒蚨鄳B(tài)性分析與腫瘤的診斷。
③新藥開發(fā)與組分篩選。
?、芑虿町惐磉_(dá)與基因表達(dá)譜的分析。
⑤病原微生物和傳染病的實(shí)驗(yàn)診斷。
13.T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測系統(tǒng)(IDAT)
IDAT(immuno-detection amplified by T RNA polymerase)，即T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測技術(shù)，該技術(shù)通過固定一種目標(biāo)蛋白質(zhì)(用信號(hào)顯示其存在)與抗體結(jié)合后激發(fā)助催化劑，后者可再激發(fā)T7核糖核酸聚合酶活化、轉(zhuǎn)錄出特定核糖核酸分子(信號(hào)分子)作為指示系統(tǒng)。IDAT法的靈敏度極高(可檢測單種蛋白質(zhì)分子)，操作簡便(可自動(dòng)化)。進(jìn)一步改良使用通用的探測分子，則可能探測無限多種蛋白質(zhì)及脂質(zhì)、糖分和其他細(xì)胞分子。IDAT技術(shù)與蛋白質(zhì)芯片技術(shù)結(jié)合將把生物芯片技術(shù)推向新水平。在癌癥早期發(fā)現(xiàn)、篩選新藥與分子樣本等重要領(lǐng)域發(fā)揮潛在用途。
14.選擇性捕獲轉(zhuǎn)錄序列的分析系統(tǒng)(SCOTS)
SCOTS技術(shù)由Graham和Clark-Curtiss等1999年建立，他們共同研究結(jié)核桿菌在人巨噬細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)與DNA修復(fù)、營養(yǎng)代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)及毒力產(chǎn)生等有關(guān)的許多基因發(fā)生了轉(zhuǎn)錄。Morrow等聯(lián)合應(yīng)用SCOTS和基因組差異雜交方法，檢測傷寒桿菌在對(duì)巨噬細(xì)胞基因組內(nèi)的某些操縱子和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子作了研究。顯然，利用SCOTS技術(shù)或與當(dāng)代的新型實(shí)驗(yàn)手段相合，可從基因組水平認(rèn)識(shí)基因表達(dá)，揭示細(xì)菌等病原體進(jìn)入機(jī)體、相互作用及感染機(jī)制，將會(huì)極大地豐富研究內(nèi)容，提高實(shí)驗(yàn)診斷水平。
