1、血清學檢查及HSV抗體檢測
(1)疑及新生兒患有宮內HSV感染者，血清(可采臍血或足跟血標本)IgM型HSV抗體檢測陽性即可確診。
(2)故對于成人疑難病例，HSV抗體檢測陽性對臨床診斷幫助不大;然而HSV抗體檢測陰性則有助于排除單純皰疹(倘若受檢者存在免疫應答功能缺陷，則不在此例)。由于成年人群中有很高的HSV抗體檢出率，大多獲自隱性感染，且抗體的存在尚不能完全保護機體免受皰疹病毒的重復感染。
2、PCR檢查
其靈敏度很高，可在數小時內做出檢測報告，已成為臨床診斷HSV感染或帶毒狀態的重要手段;但須在經過技術認證合格的實驗醫學實驗室內進行，并在操作過程中注意避免污染。利用PCR技術進行HSV基因檢測，可提供單純皰疹病毒在患者體內存在的直接證據。
鑒于HSV-2隱性感染可能是男性不育的一個原因，對不育不孕門診的就診者，應將PCR技術檢測HSV作為精液、宮頸液標本篩查的常規。
3、細胞培養
單純皰疹病毒易于進行體外細胞培養，并能產生可見的細胞病變;故可用棉拭子在病損處采樣或采集腦脊液等體液標本接種細胞，培養分離病毒作出診斷;并可采用細胞免疫組化、免疫熒光技術檢測單純皰疹病毒抗原蛋白，或原位雜交技術檢測其基因成分，進一步進行HSV-1、HSV-2的分型。
病毒細胞培養鑒定是HSV診斷的金標準，然而其技術條件要求較高，故難以在臨床普遍推廣。
