1.病原體培養(yǎng)和分離 從患者血液、淋巴結(jié)膿液和原發(fā)皮膚損害處可分離培養(yǎng)出漢賽巴通體,則診斷肯定。但該病原體大多呈細(xì)胞壁缺陷型,培養(yǎng)條件要求較高,只有在含鮮血或巧克力培養(yǎng)基,在35℃二氧化碳孵箱中培養(yǎng)6周才可生長(zhǎng),再用Warthin-Starry銀浸染色法可見多形性革蘭陰性桿菌。因而不能作為早期診斷方法,在臨床應(yīng)用上受到限制。巴爾通體表現(xiàn)為一種細(xì)小的、灰白色的、不透明的粘聚性菌落。
2.免疫學(xué)檢查
(1)間接免疫熒光抗體試驗(yàn)(IFA):用熒光素標(biāo)記的抗原,測(cè)定患者血清中的漢賽巴通體特異性抗體,其效價(jià)≥1∶64為陽(yáng)性。Demers等研究提示,采用免疫熒光抗體進(jìn)行血清巴爾通體抗體檢測(cè),特異性和敏感性均達(dá)到100%。病程早期及4~6周以上兩份血清效價(jià)有4倍以上增長(zhǎng),對(duì)診斷也有意義。本試驗(yàn)是一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏及特異確診本病最易推廣應(yīng)用的方法。
(2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA-IgM):檢測(cè)抗?jié)h賽巴通體IgM抗體,敏感性強(qiáng),特異性較好,有臨床診斷價(jià)值。ELISA~I(xiàn)gG抗體敏感性較低,不能作為實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。
(3)皮膚試驗(yàn):采用從淋巴結(jié)穿刺液經(jīng)加熱殺菌后作抗原,取抗原0.1ml前臂掌側(cè)皮內(nèi)注射,48h出現(xiàn)直徑≥5mm的硬結(jié)者為陽(yáng)性,周圍有30~40mm水腫紅暈,此紅暈一般存在48h,硬結(jié)可持續(xù)5~6天或4周。皮膚試驗(yàn)為遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),較靈敏與特異,其假陽(yáng)性約在5%。間隔4周反復(fù)2次尚陰性可除外貓抓病診斷。感染后皮膚試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)可保持10年以上。
上述IFA和ELISA-IgM抗體作為貓抓病血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn),兩者在血清型上很少有不同,并與五日熱巴通體有交叉反應(yīng)。若需分型應(yīng)作細(xì)菌培養(yǎng),以進(jìn)一步明確。
3.分子生物學(xué)檢測(cè) 近年來(lái)采用PCR、巢式PCR或PCR原位雜交技術(shù),從淋巴結(jié)活檢標(biāo)本、膿液中檢出漢賽巴通體DNA,陽(yáng)性率可達(dá)96%。但這種特異性及敏感性高的方法實(shí)驗(yàn)條件要求較高,難以作為臨床常規(guī)檢查。漢賽和五日熱巴通體DNA的PCR檢測(cè),其CAT1、CAT2一對(duì)特異性引物,其核苷酸序列(5’→3’)為GATTCAATTGGTTTGAA(G和A)GAGGCT和TCACAATCACCAGG(A和G)CGTATTC,可擴(kuò)增出414bp片段產(chǎn)物。
4.病理組織學(xué)檢查 對(duì)于活檢組織作Warthin-Starry和Brown-Hopps組織染色或組織電鏡檢查,在組織細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)多形性革蘭陰性的病原體有助診斷。但組織染色不能區(qū)別巴通體的不同菌型或其他病原體。
5.血常規(guī) 病程早期白細(xì)胞總數(shù)減少,淋巴結(jié)化膿時(shí)輕度升高,中性粒細(xì)胞增多,血沉加快。